دليل لتقنيات الاختبار المخبري للالتهاب الرئوي الجديد بفيروس كورونا
في فبراير 21, أصدرت لجنة الصحة الوطنية خطة جديدة للوقاية من الالتهاب الرئوي ومكافحته بسبب فيروس كورونا (الطبعة الخامسة), و كمرفق, أصدرت إرشادات فنية جديدة للاختبارات المعملية لعدوى فيروس كورونا والالتهاب الرئوي (الطبعة الخامسة).
دليل لتقنيات الاختبار المخبري للالتهاب الرئوي الجديد بفيروس كورونا
وذلك لتوجيه إدارات مكافحة الأمراض على كافة المستويات والمؤسسات الأخرى ذات الصلة لإجراء الاختبارات المعملية للالتهاب الرئوي الناجم عن فيروس كورونا الجديد, تم إعداد هذا الدليل الفني خصيصًا.
1. جمع العينات ومعالجتها
1. مسحات البلعوم الأنفي: يقوم جهاز أخذ العينات بدعم رأس الشخص الذي يتم جمعه بلطف, يحمل المسحة في يد واحدة, المسحة متصلة بفتحة الأنف, ويتعمق ببطء للخلف على طول الجزء السفلي من القناة الأنفية السفلية. شرسة لتجنب النزيف من الصدمة. عندما يصل طرف المسحة إلى الجدار الخلفي للتجويف البلعومي الأنفي, قم بتدويره بلطف لمدة أسبوع واحد (في حالة السعال المنعكس, يجب أن يبقى لفترة من الوقت), ثم أخرج المسحة ببطء, ثم اغمر رأس المسحة في محلول الحفظ الذي يحتوي على 2 إلى 3 مل من الفيروس (متاح أيضًا استخدام محلول ملحي متساوي التوتر, محلول زراعة الأنسجة أو محلول الفوسفات المنظم), تجاهل الذيل, وتشديد الغطاء.
2. مسحة البلعوم: يتغرغر الشخص المجمع بالمحلول الملحي الفسيولوجي أولاً, يقوم الشخص الذي يأخذ العينة بوضع المسحة في محلول ملحي عادي معقم لترطيبها (يمنع وضع المسحة في محلول حفظ الفيروس لتجنب الحساسية الناتجة عن المضادات الحيوية), رأس الشخص الذي تم جمعه مائل قليلا, اتسعت الفم, مع “آه” يبدو, تعريض اللوزتين البلعوميتين على الجانبين, المسحة فوق قاعدة اللسان, ومسح اللوزتين البلعوميتين من جانبي الموضوع بقوة قليلة ذهاباً وإياباً على الأقل 3 مرات, وبعد ذلك على الأقل 3 على الجدار الخلفي للبلعوم ثانيا, اغمر رأس المسحة في أنبوب يحتوي على 2 إلى 3 مل من محلول الحفاظ على الفيروسات (محلول ملحي متساوي التوتر, ويمكن أيضًا استخدام محلول زراعة الأنسجة أو محلول فوسفات العازل), تجاهل الذيل, وتشديد الغطاء. ويمكن أيضًا وضع المسحة البلعومية في نفس الأنبوب الذي توضع فيه المسحة البلعومية الأنفية. 3. مستخلص البلعوم الأنفي أو مستخلص الجهاز التنفسي: استخدم أداة تجميع متصلة بمضخة الضغط السلبي لاستخراج المخاط من البلعوم الأنفي أو إفرازات مجرى الهواء من القصبة الهوائية. أدخل رأس المجمع في تجويف الأنف أو القصبة الهوائية, قم بتشغيل الضغط السلبي, قم بتدوير رأس المجمع واخرج ببطء, جمع المخاط المستخرج, وشطف المجمع مرة واحدة مع 3 مل من سائل أخذ العينات (يمكنك أيضًا استخدام قسطرة الأطفال للاتصال بمجمع بديل لحقنة سعة 50 مل).
4. البلغم العميق: يُطلب من المريض جمع البلغم الناتج عن السعال في أنبوب بلاستيكي لولبي سعة 50 مل يحتوي على 3 مل من محلول العينة بعد السعال العميق. إذا لم يتم جمع البلغم في محلول أخذ العينات, أضف 2 إلى 3 مل من محلول أخذ العينات أو أضف كمية متساوية من محلول هضم البلغم قبل الاختبار.
صيغة محلول تخزين السوائل الهضمية البلغم:
قبل الاستخدام, تمييع محلول المخزون ل 100 مل مع الماء منزوع الأيونات. تحتوي على عازلة الفوسفات 1 يمكن أيضًا تسييل بروتيناز g/L K بكمية متساوية من البلغم.
5. سائل غسيل القصبات الهوائية: أدخل رأس المجمع في القصبة الهوائية (بعمق حوالي 30 سم) من فتحة الأنف أو القصبة الهوائية, حقن 5 مل من المياه المالحة, قم بتشغيل الضغط السلبي, قم بتدوير رأس المجمع واسحبه ببطء. جمع المخاط المستخرج وشطف المجمع مرة واحدة مع سائل أخذ العينات (يمكنك أيضًا استخدام قسطرة الأطفال لتوصيلها بحقنة سعة 50 مل لتحل محل المجموعة).
6. سائل غسل السنخية: بعد التخدير الموضعي, أدخل منظار القصبات الليفي البصري من خلال الفم أو الأنف من خلال البلعوم وأدخله في فرع الفص الأوسط الأيمن أو قطعة لسان الرئة اليسرى, وتناسب الطرف في فتح فرع الشعب الهوائية, ويتم ببطء إضافة التعقيم الفسيولوجي من خلال خزعة القصبة الهوائية إلى الماء المالح, 30-50مل في كل مرة, المبلغ الإجمالي هو 100-250 مل, يجب ألا يتجاوز 300 مل.
7. عينات البراز: خذ 1 مل من محلول معالجة العينات, التقط حجم عينة فول الصويا وأضفه إلى الأنبوب, مصه بلطف ل 3-5 مرات, دعها تقف في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 الدقائق, جهاز طرد مركزي بسرعة 8000 دورة في الدقيقة 5 الدقائق, وتمتص طاف للكشف.
يمكن تحضير محلول معالجة عينة البراز بنفسك: 1.211 ز تريس, 8.5 ز كلوريد الصوديوم, 1.1 ز كلوريد الكالسيوم اللامائي أو 1.47 ز كلوريد الكالسيوم المحتوي على الماء البلوري, يذوب في 800 مل من الماء منزوع الأيونات, وتعديلها إلى الرقم الهيدروجيني 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك المركز , اصنع ما يصل إلى 1000 مل من الماء منزوع الأيونات.
يمكن أيضًا تحضير معلقات البراز عن طريق إذابة عينات البراز باستخدام محلول HANK'S أو محلول ملحي متساوي التوتر., محلول زراعة الأنسجة أو محلول الفوسفات. إذا كان المريض يعاني من أعراض الإسهال, يترك 3 إلى 5 مل من عينة البراز, ماصة بلطف وتخلط, الطرد المركزي عند 8000 دورة في الدقيقة ل 5 الدقائق, ورسم طاف للاستخدام.
8. مسحة الشرج: أدخل بلطف قطعة قطن معقمة في فتحة الشرج 3 ~ 5 سم, ثم قم بتدويره بلطف واسحبه للخارج, ضعه على الفور في أنبوب أخذ العينات ذو الغطاء اللولبي الخارجي سعة 15 مل والذي يحتوي على 3 ~ 5 مل من محلول الحفاظ على الفيروسات, تجاهل الذيل, وتشديد غطاء الأنبوب.
9. عينات الدم: يوصى باستخدام أوعية دموية مفرغة تحتوي على مضاد التخثر EDTA لجمع 5 مل من عينات الدم. تحديد استخراج الحمض النووي بالدم الكامل أو البلازما وفقا لنوع كاشف استخراج الحمض النووي المحدد. لفصل البلازما, الطرد المركزي للدم كله في 1500-2000 دورة في الدقيقة ل 10 دقائق وجمع المادة طافية في أنبوب بلاستيكي معقم ملولب.
10. عينة المصل: اجمع 5 مل من عينة الدم باستخدام أنبوب جمع الدم ذو الضغط السلبي المفرغ, دعونا نقف في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 الدقائق, جهاز طرد مركزي بسرعة 1500 إلى 2000 دورة في الدقيقة 10 الدقائق, جمع المصل في أنبوب بلاستيكي معقم.
مواد أخرى: جمع وفقا لمتطلبات التصميم.
(5) تعبئة العينات
بعد الجمع, سيتم تعبئتها في خزانة السلامة الحيوية في المختبر الثانوي للسلامة الحيوية.
1. يجب وضع جميع العينات في أنبوب جمع العينات ذو الحجم المناسب مع غطاء لولبي وحشية مقاومة للتجمد, وشددت. رقم العينة, يكتب, يشار إلى الاسم وتاريخ أخذ العينات على الجزء الخارجي من الحاوية.
2. ضع العينات المختومة في كيس مغلق, يقتصر كل كيس على عينة واحدة. يجب أن تستوفي متطلبات تعبئة العينات المعايير المقابلة في “القواعد الفنية للنقل الآمن للبضائع الخطرة جواً”.
3. لنقل العينات الخارجية, يجب أن يتم التغليف ثلاثي الطبقات وفقًا لنوع العينات والمواد المعدية من الصنف (أ) أو (ب)..
(6) حفظ العينات
يجب اختبار العينات المستخدمة لعزل الفيروس واختبار الحمض النووي في أسرع وقت ممكن. العينات التي يمكن الكشف عنها داخل 24 يمكن تخزين ساعات عند 4 درجات مئوية; العينات التي لا يمكن اكتشافها في الداخل 24 يجب تخزين الساعات عند -70 درجة مئوية أو أقل (إذا لم يكن كذلك- مخزنة في 70 درجة مئوية, يتم تخزينه مؤقتًا في الثلاجة عند -20 درجة مئوية). يمكن تخزين المصل عند درجة حرارة 4 درجات مئوية 3 أيام, وأقل من -20 درجة مئوية للتخزين طويل الأمد. يجب إنشاء مستودعات أو عدادات خاصة لحفظ العينات بشكل منفصل. تجنب تكرار التجميد والذوبان أثناء نقل العينات.
(7) العينات المقدمة للفحص
يجب إرسال العينات إلى المختبر في أقرب وقت ممكن بعد جمعها. إذا كان النقل لمسافات طويلة مطلوبا, يوصى باستخدام الثلج الجاف وطرق التبريد الأخرى للحفظ.
لا يمكن لنتائج اختبار الحمض النووي السلبية أن تستبعد الإصابة بفيروس كورونا الجديد. يجب استبعاد العوامل التي قد تسبب سلبيات كاذبة, مشتمل: نوعية عينة سيئة, مثل عينات الجهاز التنفسي من البلعوم, إلخ.; العينات التي تم جمعها في وقت مبكر جدًا أو متأخر جدًا; عدم تخزينها ونقلها وتجهيز العينات بشكل صحيح; أسباب وجود التكنولوجيا نفسها, مثل الطفرة الفيروسية, تثبيط PCR, التعقيم هو استخدام طرق فيزيائية أو كيميائية لتدمير جميع الكائنات الحية الدقيقة بما في ذلك أعداد كبيرة من الجراثيم البكتيرية المقاومة.
توافد صانع مسحة
