Guía de técnicas de pruebas de laboratorio para la neumonía por nuevo coronavirus

Guía de técnicas de pruebas de laboratorio para la neumonía por nuevo coronavirus
en febrero 21, La Comisión Nacional de Salud emitió un nuevo plan de prevención y control de la neumonía por coronavirus. (quinta edición), y como anexo, publicó unas nuevas directrices técnicas para las pruebas de laboratorio de neumonía por infección por coronavirus (quinta edición).

Guía de técnicas de pruebas de laboratorio para la neumonía por nuevo coronavirus

Para guiar a los departamentos de control de enfermedades en todos los niveles y otras instituciones relevantes para realizar pruebas de laboratorio de la nueva neumonía por coronavirus, Esta guía técnica está especialmente formulada.
1. Recolección y procesamiento de muestras
1. Hisopos nasofaríngeos: La muestra apoya suavemente al jefe de la persona que se recolecta, sostiene el hisopo en una mano, El hisopo está unido a la fosa nasal, y lentamente se profundiza hacia atrás a lo largo del fondo del canal nasal inferior. Feroz para evitar sangrar por trauma. Cuando la punta del hisopo alcanza la pared posterior de la cavidad nasofaríngea, gírelo suavemente durante una semana (En caso de tos refleja, Debería quedarse por un tiempo), Entonces saque lentamente el hisopo, e sumergir el cabezal de hisopo en la solución de preservación que contiene 2 a 3 ml de virus (También disponible Use solución de solución salina isotónica, Solución de cultivo de tejidos o solución de tampón fosfato), descartar la cola, y apriete la tapa.
2. Hisopo faríngeo: La persona recolectada garga con solución salina fisiológica, La persona de muestreo pone el hisopo en solución salina normal estéril para humedecerlo (Está prohibido poner el hisopo en la solución de preservación del virus para evitar la alergia causada por antibióticos), la cabeza de la persona recogida ligeramente inclinada, boca ensanchada, con “ah” sonidos, Exponer las amígdalas faríngeas en ambos lados, el hisopo sobre la base de la lengua, y limpiando las amígdalas faríngeas en ambos lados del sujeto con un poco duro de ida y vuelta al menos 3 veces, Y luego al menos 3 en la pared posterior de la faringe segundo, sumergir el cabezal de hisopo en un tubo que contiene 2 a 3 Ml de solución de preservación de virus (solución salina isotónica, La solución de cultivo de tejidos o la solución de tampón fosfato también se pueden usar), descartar la cola, y apriete la tapa. El hisopo faríngeo también se puede colocar en el mismo tubo que el hisopo nasofaríngeo. 3. Extracto nasofaríngeo o extracto de tracto respiratorio: Use un colector conectado a una bomba de presión negativa para extraer moco de la nasofaringe o secreciones de vías respiratorias de la tráquea. Inserte la cabeza del colector en la cavidad nasal o la tráquea, Encienda la presión negativa, Gire la cabeza del coleccionista y salga lentamente, recoge la mucosidad extraída, y enjuague el coleccionista una vez con 3 ml de líquido de muestreo (También puede usar un catéter pediátrico para conectarse a un colector alternativo de jeringa de 50 ml).
4. Esputo profundo: Se requiere que el paciente recolecte el esputo tose en un tubo de plástico de tos de 50 ml que contiene 3 ml de la solución de muestra después de la tos profunda. Si el esputo no se recoge en la solución de muestreo, Agregue 2 ~ 3 ml de la solución de muestreo o agregue un volumen igual de solución de digestión con esputo antes de la prueba.
Fórmula de solución de almacenamiento de fluido digestivo de esputo:
Antes de usar, diluir la solución madre para 100 Ml con agua desionizada. Tampón fosfato que contiene 1 La proteinasa K G/L también se puede licuar con un volumen igual de esputo.
5. Fluido de lavado bronquial: Inserte la cabeza del colector en la tráquea (unos 30 cm de profundidad) desde la nasal o el zócalo traqueal, inyectar 5 ml de solución salina, Encienda la presión negativa, gire la cabeza del coleccionista y retire lentamente. Recoja la moco extraída y enjuague el colector una vez con el líquido de muestreo (También puede usar un catéter pediátrico para conectarse a una jeringa de 50 ml para reemplazar la colección).
6. Fluido de lavado alveolar: Después de la anestesia local, Inserte el broncoscopio de fibra óptica a través de la boca o la nariz a través de la faringe y inserte en la rama del lóbulo medio derecho o el segmento de la lengua pulmonar izquierda, y coloque la punta en la apertura de la rama bronquial, y agregue lentamente la fisiología de la esterilización a través del agujero de biopsia traqueal agua salada, 30-50ml cada vez, La cantidad total es de 100-250 ml, no debe exceder los 300 ml.
7. Especímenes fecales: Tome 1 ml de la solución de procesamiento de muestras, Recoja el tamaño de la muestra de soja y agréguelo al tubo, chuparlo suavemente por 3-5 veces, Déjalo pararse a temperatura ambiente para 10 minutos, centrífuga a 8000 rpm para 5 minutos, y chupar el sobrenadante para la detección.
La solución de tratamiento de la muestra de heces puede prepararse usted mismo: 1.211 G Tris, 8.5 G cloruro de sodio, 1.1 G cloruro de calcio anhidro o 1.47 G cloruro de calcio que contiene agua de cristal, disuelto en 800 Ml de agua desionizada, y ajustado al pH 7.5 con ácido clorhídrico concentrado , Configurar hasta 1000 ml con agua desionizada.
Las suspensiones de heces también se pueden preparar disolviendo muestras de heces utilizando la solución de Hank u otra solución de solución salina isotónica, Solución de cultivo de tejidos o tampón fosfato. Si el paciente tiene síntomas de diarrea, dejar 3 a 5 Ml de la muestra de heces, pipeta suavemente y mezclar, centrífuga en 8000 RPM para 5 minutos, y dibuja el sobrenadante para usar.
8. hisopo anal: Inserte suavemente un hisopo de algodón estéril en el ano 3 ~ 5 cm, luego gire suavemente y sácalo, Póngalo inmediatamente en un tubo de muestreo de tornillo exterior de 15 ml que contenga una solución de preservación del virus de 3 ~ 5 ml, descartar la cola, y apriete la cubierta del tubo.
9. Muestras de sangre: Se recomienda usar vasos sanguíneos de vacío que contengan anticoagulante EDTA para recolectar 5 ml de muestras de sangre. Determine la extracción de ácido nucleico con sangre completa o plasma de acuerdo con el tipo de reactivo de extracción de ácido nucleico seleccionado. Para separar el plasma, centrifugarse toda la sangre a 1500-2000 rpm para 10 minutos y recoge el sobrenadante en un tubo de plástico estéril de tornillo.
10. Espécimen de suero: Recoge 5 ml de muestra de sangre con un tubo de recolección de sangre de presión negativa al vacío, Dejar reposar a temperatura ambiente para 30 minutos, centrífuga a 1500 ～ 2000 rpm para 10 minutos, Recoge suero en un tubo de plástico estéril de tornillo.
Otros materiales: Recopilar según los requisitos de diseño.
(5) Embalaje de especímenes
Después de la colección, Se empacará en el gabinete de bioseguridad del laboratorio secundario de bioseguridad.
1. Todas las muestras deben colocarse en un tubo de recolección de muestras de tamaño adecuado con una tapa de tornillo y una junta resistente a la congelación, y apretado. El número de muestra, tipo, El nombre y la fecha de muestreo se indican en el exterior del contenedor.
2. Coloque las muestras selladas en una bolsa sellada, Cada bolsa se limita a un espécimen. Los requisitos de empaque de muestra deben cumplir con los estándares correspondientes en el “Reglas técnicas para el transporte seguro de productos peligrosos por aire”.
3. Para el transporte de muestras externas, El embalaje de tres capas se llevará a cabo de acuerdo con el tipo de especímenes y sustancias infecciosas de la Clase A o B.
(6) Conservación de especímenes
Las muestras utilizadas para el aislamiento del virus y las pruebas de ácido nucleico deben probarse lo antes posible. Muestras que se pueden detectar dentro 24 Las horas se pueden almacenar a 4 ° C; especímenes que no se pueden detectar dentro 24 Las horas deben almacenarse a -70 ° C o menos (si no- Almacenado a 70 ℃, almacenado temporalmente en el refrigerador a -20 ℃). El suero se puede almacenar a 4 ° C para 3 dias, y por debajo de -20 ° C para el almacenamiento a largo plazo. Se deben establecer almacenes o contadores especiales para preservar especímenes por separado. Evite la congelación y descongelación repetidas durante el transporte de muestras.
(7) Muestras enviadas para inspección
Las muestras deben enviarse al laboratorio lo antes posible después de la recolección. Si se requiere transporte de larga distancia, Se recomienda usar hielo seco y otros métodos de refrigeración para la preservación..

Los resultados de las pruebas de ácido nucleico negativo no pueden descartar una nueva infección por coronavirus. Los factores que pueden causar falsos negativos deben ser excluidos, incluido: Mala calidad de muestra, tales como muestras respiratorias de la orofaringe, etc.; Las muestras recolectadas demasiado temprano o demasiado tarde; no se almacenan y transporta adecuadamente y procesan muestras; razones para la existencia de la tecnología en sí, como la mutación viral, Inhibición de PCR, etc..