PCR与PCR有什么区别, qPCR 和 RT-PCR?

PCR 或聚合酶链反应, 是一种扩增感兴趣基因的生物技术工具. 简单的PCR用于基因的检测和扩增. 有各种先进的PCR方法, 用于各种生物技术, 诊断和研究目的. qPCR 或定量 PCR 也称为实时 PCR. qPCR 用于量化核酸. 可以在 PCR 期间监测 DNA 分子的扩增, IE. 实时. RT-PCR被称为逆转录聚合酶链反应. 它利用两个过程, IE. 逆转录和聚合酶链反应. 用于检测和测量RNA的量.

人们经常混淆术语 PCR, 逆转录聚合酶链反应, 和QPCR一样. 但他们不一样. 然而, 所有三种类型的核心原则保持不变. 在讨论所有三个 PCR 的差异之前, 我们应该知道它们到底是什么?

什么是PCR?

聚合酶链式反应或 PCR 用于扩增或产生基因或短链 DNA 的多个拷贝. 它是由 Kary Mullis 发明的. 该技术是分子生物学和生物技术中非常有用的工具. 它在实验室中用于制作数十亿份 DNA 用于研究和诊断. PCR分为三个步骤: 变性, 引物退火和引物延伸.

它需要两组与 DNA 模板两端互补的引物和一种耐热的 DNA 聚合酶. 聚合酶循环反复重复以获得 DNA 片段的多个拷贝.

聚合酶链式反应的三个步骤是:

变性: 在这一步, 双链DNA被分离. 形成单链DNA.
退火: 降低反应温度以允许引物的互补碱基配对和退火.
扩大: Taq聚合酶, 这是一种热稳定的 DNA 聚合酶, 通常用于此目的. DNA 聚合酶将核苷酸添加到引物中并沿 5'-3' 方向延伸互补链.

什么是 qPCR?

qPCR 或定量 PCR 也称为实时 PCR. 它在 RT-qPCR 中对 DNA 或 RNA 进行了额外的定量分析.

在 qPCR 或实时 PCR 中, 顾名思义, 随着 PCR 的进行，可以监测扩增. 在 qPCR 中, 荧光标记允许在进行聚合酶链反应时实时收集数据.

可以通过两种方法在 qPCR 中实时检测 PCR 产物:

使用非特异性荧光染料有助于检测双链 DNA. dsDNA 结合染料在 DNA 扩增时发出荧光信号, 并且在每个周期后增加. 这种方法的缺点是一次只能检查一个靶标，因为它与所有 dsDNA 片段结合.
使用荧光标记的 DNA 探针, 这是特定于序列的. 它们可以在与其互补序列杂交后被检测到. 由于 DNA 探针是目标特异性的, 可以同时分析许多目标.

什么是RT-PCR?

RT-PCR 或逆转录 PCR 包括两个步骤, 首先是逆转录过程, 第二种是通过聚合酶链式反应或 PCR 扩增所需的 DNA 序列. RT-PCR 用于检测样品中的 RNA. 可使用RT-qPCR测量RNA量. RT-PCR 结合 qPCR (实时定量PCR) 在病毒RNA和基因表达的定量分析中非常有用.

RT-PCR步骤与PCR相同, 额外的第一步逆转录. 在 RT-PCR 中, 互补DNA (cDNA) 首先使用逆转录酶产生 (转播). cDNA, 如此形成, 然后用作 PCR 标准扩增过程的模板.

PCR 之间的主要区别, RT PCR 和 qPCR:

以上内容可以根据以下几点进行总结:

• PCR 是一种简单的技术，用于创建所需 DNA 片段的多个拷贝. 逆转录聚合酶链反应, 另一方面, 用于RNA扩增. 相反, qPCR 参与相应样品中核酸的定量.
• PCR和RT PCR是定性技术, 但 qPCR 是一种定量技术.
• PCR 的初始模板是双链 DNA, 而RT PCR只能以RNA为模板。除了这些, qPCR 具有同时使用 DNA 和 RNA 的能力.
• PCR是一种灵敏度和特异性较低的技术. 相比之下, RT PCR 和 qPCR 非常灵敏和特异.
• PCR扩增产物分辨率超低. 另一方面, RT PCR和qPCR的PCR产物分辨率更高.
• 传统 PCR 只需要 DNA 聚合酶. 但是 RT PCR 和 qPCR 需要逆转录酶和 DNA 聚合酶.
• 聚合酶链反应, 像 RT PCR, 与荧光无关, 但qPCR主要是基于荧光原理.
• PCR和RT-PCR的结果在反应结束时得到, 但是 qPCR 以峰和图的形式同时生成结果.